一、引言

绵羊肺腺瘤病毒（Ovine pulmonary adenomatosis virus，OPAV）是引起绵羊肺腺瘤病（Ovine pulmonary adenomatosis，OPA）的病原体，是一种双链DNA病毒，属于反转录病毒科。OPA是一种慢性、进行性、致死性的传染病，主要特征是肺部形成腺瘤样结节，导致绵羊呼吸困难、消瘦、死亡。OPAV的感染率和发病率在全球范围内呈上升趋势，给养羊业带来了巨大的经济损失。建立一种快速、准确、灵敏的OPAV检测方法对于预防和控制OPA的发生和流行具有重要意义。

二、检测原理

GB/T34736-2017《绵羊肺腺瘤病毒核酸斑点杂交检测技术》规定了绵羊肺腺瘤病毒核酸斑点杂交检测的技术要求和操作步骤。该标准采用斑点杂交技术，将绵羊肺腺瘤病毒核酸样品固定在硝酸纤维素膜上，然后与标记的OPAV特异性探针杂交，通过检测杂交信号来判断样品中是否存在OPAV核酸。

三、检测试剂和材料

1. 试剂：OPAV特异性探针、杂交液、洗涤液、显色液等。

2. 材料：硝酸纤维素膜、尼龙膜、滤纸、剪刀、镊子、移液器、杂交炉、洗膜机、显色仪等。

四、检测步骤

1. 样品采集：采集绵羊的肺组织、淋巴结、血液等样品，按照GB/T18936-2003《绵羊和山羊疫病诊断技术》的要求进行处理和保存。

2. 核酸提取：采用酚氯仿法或柱层析法等方法提取绵羊肺腺瘤病毒核酸。

3. 点样：将提取的绵羊肺腺瘤病毒核酸样品点在硝酸纤维素膜或尼龙膜上，晾干备用。

4. 杂交：将点好样的硝酸纤维素膜或尼龙膜放入杂交炉中，加入杂交液和标记的OPAV特异性探针，在一定温度下杂交一定时间。

5. 洗膜：将杂交后的硝酸纤维素膜或尼龙膜放入洗膜机中，用洗涤液洗涤一定时间，去除未杂交的探针。

6. 显色：将洗好膜的硝酸纤维素膜或尼龙膜放入显色仪中，加入显色液，在一定温度下显色一定时间，观察杂交信号。

五、结果判定

1. 阳性判定：在硝酸纤维素膜或尼龙膜上出现清晰的杂交信号，且与阳性对照的杂交信号强度相当，判定为阳性。

2. 阴性判定：在硝酸纤维素膜或尼龙膜上未出现杂交信号，或杂交信号强度低于阴性对照的杂交信号强度，判定为阴性。

3. 无效判定：在硝酸纤维素膜或尼龙膜上未出现杂交信号，或杂交信号强度高于阳性对照的杂交信号强度，或杂交信号不清晰，无法判断，判定为无效。