一、引言

副结核分枝杆菌是一种重要的人畜共患病原菌，可引起反刍动物的副结核病，给畜牧业带来严重的经济损失。建立一种快速、准确、灵敏的副结核分枝杆菌检测方法具有重要的意义。

二、检测原理

GB/T27637-2011副结核分枝杆菌实时荧光PCR检测方法基于实时荧光PCR技术，该技术利用荧光染料或荧光标记的特异性引物与模板DNA结合，在PCR扩增过程中，随着扩增产物的增加，荧光信号也随之增强，通过实时监测荧光信号的变化，可以实现对模板DNA的定量分析。

三、检测试剂和仪器

1. 试剂：副结核分枝杆菌实时荧光PCR检测试剂盒、DNA提取试剂盒、阳性对照品、阴性对照品、PCR反应液、荧光染料等。

2. 仪器：实时荧光PCR仪、离心机、移液器、涡旋振荡器、凝胶成像系统等。

四、检测步骤

1. 样品采集：采集疑似感染副结核分枝杆菌的动物组织或粪便样本。

2. DNA提取：按照DNA提取试剂盒的说明书，提取样品中的DNA。

3. PCR扩增：将提取的DNA加入到PCR反应液中，加入荧光染料，然后加入特异性引物，进行PCR扩增。

4. 结果分析：将PCR扩增产物加入到凝胶成像系统中，观察扩增产物的大小和荧光强度，判断样品是否感染副结核分枝杆菌。

五、注意事项

1. 实验操作：实验操作应严格按照GB/T27637-2011副结核分枝杆菌实时荧光PCR检测方法的操作规程进行，避免操作失误导致检测结果不准确。

2. 试剂和仪器：实验所用的试剂和仪器应符合相关标准和要求，定期进行校准和维护，确保检测结果的准确性和可靠性。

3. 质量控制：实验过程中应设置阳性对照品和阴性对照品，定期进行质量控制，确保检测结果的准确性和可靠性。

4. 安全防护：实验过程中应注意安全防护，避免接触有毒有害物质，防止发生意外事故。

副结核分枝杆菌实时荧光PCR检测方法是一种快速、准确、灵敏的检测方法，可用于检测动物组织和粪便样本中的副结核分枝杆菌。该方法操作简单，结果准确可靠，可广泛应用于畜牧业生产和动物疫病防控工作中。