一、引言

番茄褐色皱果病毒（Tomato brown rugose fruit virus，ToBRFV）是一种严重危害番茄生产的病毒。为了有效防控ToBRFV的传播和危害，保障番茄产业的健康发展，制定科学、准确的检疫鉴定方法至关重要。本文依据GB/T45589-2025《番茄褐色皱果病毒检疫鉴定方法》，详细介绍该病毒的检疫鉴定流程和技术要点。

二、病毒形态与特性

ToBRFV为单链正义RNA病毒，粒体球状，直径约28-30nm。该病毒寄主范围广泛，可侵染番茄、辣椒、茄子等茄科植物。病毒在寄主植物体内的分布具有一定的规律性，主要集中在维管束组织和韧皮部。

三、检测样本采集

1. 田间采样

- 选择具有典型症状的番茄植株，如叶片卷曲、皱缩、畸形，果实褐色皱缩等。

- 采集病株的叶片、茎尖、果实等组织，每个样本量不少于5g。

- 标记好样本的来源、采集时间、地点等信息。

2. 室内采样

- 对于田间采集的样本，应尽快带回实验室进行处理。

- 对于无法及时带回实验室的样本，可在4℃条件下保存，但保存时间不宜超过24小时。

四、检测方法

1. 症状观察

- 对采集的样本进行症状观察，初步判断是否感染ToBRFV。

- 典型症状包括叶片卷曲、皱缩、畸形，果实褐色皱缩等。

2. 分子生物学检测

- 病毒核酸提取

- 采用CTAB法或其他适合的方法提取样本中的病毒核酸。

- 提取的核酸应进行质量检测，确保其纯度和浓度符合要求。

- 实时荧光定量PCR检测

- 根据ToBRFV的特异性序列设计引物和探针。

- 以提取的病毒核酸为模板，进行实时荧光定量PCR扩增。

- 通过Ct值判断样本中是否存在ToBRFV。

- 病毒粒体观察

- 采用电子显微镜观察法，观察样本中的病毒粒体形态和结构。

- 观察结果应与ToBRFV的形态特征进行比对，确定是否感染ToBRFV。

五、结果判定与报告

1. 结果判定

- 实时荧光定量PCR检测结果为阳性，且病毒粒体观察结果与ToBRFV的形态特征一致，判定为感染ToBRFV。

- 实时荧光定量PCR检测结果为阴性，但病毒粒体观察结果与ToBRFV的形态特征不一致，应进行重复检测。

- 实时荧光定量PCR检测结果为阴性，且病毒粒体观察结果与ToBRFV的形态特征一致，判定为未感染ToBRFV。

2. 报告

- 检测报告应包括样本来源、采集时间、检测方法、检测结果等信息。

- 检测报告应由检测人员签字并加盖检测机构公章。

番茄褐色皱果病毒检疫鉴定方法是保障番茄产业健康发展的重要技术手段。通过严格按照GB/T45589-2025标准进行检测，可以准确、快速地判断番茄植株是否感染ToBRFV，为疫情防控提供科学依据。