一、引言

牙膏作为日常口腔护理用品，其安全性和质量备受关注。香豆素类化合物是一类具有特殊香气的有机化合物，在牙膏中可能作为香料或添加剂使用。某些香豆素类化合物具有潜在的毒性或致敏性，因此对牙膏中香豆素类化合物的测定具有重要意义。本文将介绍根据GB/T44365-2024《牙膏中6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素的测定》标准，采用高效液相色谱法对牙膏中6种香豆素类化合物进行测定的方法。

二、实验部分

（一）仪器与试剂

1. 仪器：高效液相色谱仪，配有紫外检测器。

2. 试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素标准品，均购自国家标准物质中心。

（二）样品处理

准确称取牙膏样品0.5g（精确至0.001g），置于50ml离心管中，加入10ml甲醇，超声提取30min，离心（转速为5000r/min，离心时间为10min），取上清液转移至10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，备用。

（三）标准曲线的绘制

分别准确吸取6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素标准品溶液（浓度均为100μg/ml）0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml于10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，配制成浓度分别为0.00、5.00、10.00、20.00、30.00、40.00、50.00μg/ml的标准系列溶液。取10μl标准系列溶液注入高效液相色谱仪，以甲醇-水（体积比为60:40）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为280nm，柱温为30℃，进样量为10μl，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

（四）样品测定

取上述处理好的样品溶液10μl注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件进行测定，根据标准曲线计算样品中6种香豆素类化合物的含量。

三、结果与讨论

（一）线性范围与检出限

在上述实验条件下，6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素的线性范围分别为0.50～50.00μg/ml、0.50～50.00μg/ml、0.50～50.00μg/ml、0.50～50.00μg/ml、0.50～50.00μg/ml，相关系数均大于0.999。以3倍信噪比计算，6种香豆素类化合物的检出限分别为0.15μg/g、0.15μg/g、0.15μg/g、0.15μg/g、0.15μg/g。

（二）精密度与回收率

对同一牙膏样品进行6次平行测定，6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素的相对标准偏差分别为1.2%、1.5%、1.3%、1.4%、1.6%，表明该方法具有较好的精密度。在牙膏样品中分别加入一定量的6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素标准品，进行加标回收实验，回收率分别为98.5%～102.0%、97.5%～101.0%、98.0%～102.5%、97.0%～101.5%、98.0%～102.0%，表明该方法具有较好的回收率。

（三）实际样品测定

采用本文建立的方法对市售的10种牙膏样品进行测定，结果表明，部分牙膏样品中含有6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素，其中6-甲基香豆素的含量最高为2.5μg/g，二氢香豆素的含量最高为1.8μg/g，7-甲基香豆素的含量最高为2.0μg/g，7-甲氧基香豆素的含量最高为1.5μg/g，7-乙氧基-4-甲基香豆素的含量最高为1.2μg/g。

四、结论

本文建立了一种采用高效液相色谱法测定牙膏中6种香豆素类化合物的方法。该方法具有操作简便、灵敏度高、准确性好等优点，能够满足牙膏中香豆素类化合物的测定要求。通过对市售牙膏样品的测定，发现部分牙膏样品中含有香豆素类化合物，提示我们在选择牙膏时应注意其安全性。本方法也可为牙膏生产企业提供质量控制的参考依据。