一、引言

黄曲霉毒素B1是一种由黄曲霉和寄生曲霉产生的次生代谢产物，具有很强的毒性和致癌性。它广泛存在于饲料、谷物、坚果等农产品中，对动物和人类的健康造成严重威胁。准确检测饲料中黄曲霉毒素B1的含量对于保障饲料质量和动物健康至关重要。

二、检测方法

目前，饲料中黄曲霉毒素B1的检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、免疫亲和柱净化-高效液相色谱法等。HPLC法是目前国际上公认的最准确、最可靠的检测方法之一，具有灵敏度高、准确性好、选择性强等优点。ELISA法具有操作简便、快速、成本低等优点，但灵敏度和准确性相对较低。免疫亲和柱净化-高效液相色谱法是将免疫亲和柱净化和HPLC法相结合的一种检测方法，具有灵敏度高、准确性好、选择性强等优点，是目前饲料中黄曲霉毒素B1检测的常用方法之一。

三、实验步骤

1. 样品制备：将饲料样品粉碎，过40目筛，称取适量样品于离心管中，加入适量的甲醇-水（80:20，v/v）溶液，涡旋振荡10min，超声提取30min，离心10min，取上清液于另一个离心管中，重复提取2次，合并上清液，用甲醇-水（80:20，v/v）溶液定容至刻度，摇匀，备用。

2. 净化：将免疫亲和柱用甲醇-水（80:20，v/v）溶液预洗3次，每次5ml，弃去流出液，然后将样品溶液加入免疫亲和柱中，流速控制在1ml/min，弃去流出液，用甲醇-水（80:20，v/v）溶液洗脱免疫亲和柱，收集洗脱液，用氮气吹干，用甲醇-水（80:20，v/v）溶液定容至1ml，摇匀，备用。

3. 检测：将净化后的样品溶液注入高效液相色谱仪中，采用C18色谱柱，流动相为甲醇-水（80:20，v/v），流速为1ml/min，检测波长为360nm，柱温为30℃，进样量为20μl。

四、结果与讨论

1. 标准曲线的绘制：以黄曲霉毒素B1标准溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。标准曲线的线性范围为0.05μg/L～10μg/L，相关系数r≥0.999。

2. 回收率的测定：在饲料样品中加入一定量的黄曲霉毒素B1标准溶液，按照实验步骤进行检测，计算回收率。回收率在80%～120%之间，相对标准偏差（RSD）小于10%。

3. 精密度的测定：对同一饲料样品进行6次重复检测，计算相对标准偏差（RSD）。RSD小于10%，表明该检测方法具有较好的精密度。

五、结论

本实验采用免疫亲和柱净化-高效液相色谱法对饲料中黄曲霉毒素B1进行了检测，该方法具有灵敏度高、准确性好、选择性强等优点，能够满足饲料中黄曲霉毒素B1的检测需求。本实验还对该方法的标准曲线、回收率和精密度进行了测定，结果表明该方法具有较好的线性关系、回收率和精密度。