一、引言

猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）是引起猪支原体肺炎（Porcine Mycoplasmal Pneumonia，PMP）的主要病原体，给养猪业带来了严重的经济损失。快速、准确地检测猪肺炎支原体对于防控猪支原体肺炎具有重要意义。GB/T 35909-2018《猪肺炎支原体PCR检测方法》是我国现行的猪肺炎支原体检测标准，本文将对该标准的检测方法进行详细介绍。

二、样品采集

1. 组织样品：采集猪的肺脏、气管、支气管等组织样品。

2. 拭子样品：采集猪的鼻腔、咽喉等部位的拭子样品。

3. 血液样品：采集猪的静脉血。

三、核酸提取

1. 组织样品：将组织样品剪碎，加入适量的裂解液，匀浆后离心，取上清液进行核酸提取。

2. 拭子样品：将拭子样品放入裂解液中，振荡后离心，取上清液进行核酸提取。

3. 血液样品：将血液样品离心，取上清液进行核酸提取。

四、PCR扩增

1. 引物设计：根据猪肺炎支原体的基因序列，设计特异性引物。

2. PCR反应体系：将提取的核酸样品、引物、dNTP、Taq DNA聚合酶、MgCl2等加入PCR反应管中，配制PCR反应体系。

3. PCR反应条件：设置PCR反应的循环次数、退火温度、延伸时间等反应条件。

4. PCR产物检测：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察PCR产物的大小和数量。

五、结果判定

1. 阳性对照：以已知阳性样品作为阳性对照，检测PCR反应体系的有效性。

2. 阴性对照：以无菌水作为阴性对照，检测PCR反应体系的污染情况。

3. 结果判定：如果PCR产物的大小与预期一致，且阴性对照无扩增产物，阳性对照有扩增产物，则判定样品为阳性；如果PCR产物的大小与预期不一致，或阴性对照有扩增产物，或阳性对照无扩增产物，则判定样品为阴性。