一、引言

牛病毒性腹泻/粘膜病（Bovine viral diarrhea-mucosal disease，BVD/M）是由牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）引起的一种重要的牛传染病，可导致牛的繁殖障碍、呼吸道疾病、消化道疾病等多种临床症状，给养牛业带来了巨大的经济损失。准确、快速地诊断BVD/M对于控制疫情、保护牛群健康具有重要意义。本文将根据GB/T18637-2018《牛病毒性腹泻/粘膜病诊断技术规范》，介绍BVD/M的检测技术。

二、病毒分离鉴定

病毒分离鉴定是诊断BVD/M的金标准。根据GB/T18637-2018，病毒分离鉴定的具体操作步骤如下：

1. 病料采集：采集病牛的血液、组织、分泌物等病料。

2. 病毒分离：将病料接种到细胞培养物中，如牛肾细胞、牛睾丸细胞等，观察细胞病变。

3. 病毒鉴定：通过病毒的形态、大小、结构、抗原性等特征，以及病毒的致病性、血清学反应等方法，对分离得到的病毒进行鉴定。

三、血清学检测

血清学检测是诊断BVD/M的常用方法。根据GB/T18637-2018，血清学检测的具体操作步骤如下：

1. 抗体检测：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光试验（IFA）等方法，检测病牛血清中的抗体。

2. 抗原检测：采用免疫酶染色试验（IEST）、免疫印迹试验（Western blot）等方法，检测病牛血清中的抗原。

四、分子生物学检测

分子生物学检测是诊断BVD/M的快速、灵敏的方法。根据GB/T18637-2018，分子生物学检测的具体操作步骤如下：

1. 核酸提取：采用酚氯仿法、试剂盒法等方法，提取病料中的核酸。

2. 核酸扩增：采用聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光定量PCR（qPCR）等方法，扩增病料中的核酸。

3. 核酸检测：采用琼脂糖凝胶电泳、核酸杂交、核酸测序等方法，检测扩增得到的核酸。

五、结论

根据GB/T18637-2018《牛病毒性腹泻/粘膜病诊断技术规范》，牛病毒性腹泻/粘膜病的检测技术包括病毒分离鉴定、血清学检测、分子生物学检测等多种方法。不同的检测方法具有不同的优缺点，应根据实际情况选择合适的检测方法。为了确保检测结果的准确性和可靠性，应严格按照检测技术规范进行操作。